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常見流式細胞儀的細胞分選原理

更新時間:2022-06-07      點擊次數(shù):3923
流式細胞儀是對細胞進行自動分析和分選的裝置,可以檢測熒光染料從400nm到900nm的全部發(fā)射光譜(full spectrum);使用解析技術(shù),即使發(fā)射光譜重合度很高的兩個熒光染料,也可以輕松區(qū)別,可檢測多達51個通道。同時借助全新設(shè)計的光路系統(tǒng)和電子信號處理系統(tǒng),可以保證高靈敏度和分辨率。
開始使用流式細胞儀,第一步是準(zhǔn)備要分析的樣品。從細胞培養(yǎng)物,血液或分解的組織中獲得的細胞應(yīng)制成懸浮液。將該細胞懸浮液分成數(shù)個試管進行染色,保留未染色細胞作為對照。通過添加標(biāo)記有熒光探針的抗體或染色細胞成分的染料對其他細胞樣品染色。分析細胞內(nèi)蛋白質(zhì)時,首先必須將細胞固定(使用福爾馬林緩沖液)并進行透化(使用透化劑),以使抗體和染料進入細胞。細胞與抗體或染料孵育后,將細胞在緩沖液中洗滌,然后重懸在基于鹽的緩沖液中進行分析。然后將準(zhǔn)備好的樣品引入流式細胞儀。
細胞分選原理:
在壓電晶體上加上頻率為30kHz的信號,使之產(chǎn)生同頻率的機械振動,流動室也隨之振動,這樣通過測量區(qū)的液柱斷裂成一連串均勻的液滴。
在細胞形成液滴以前,各類細胞的特性已在測量區(qū)被測定并儲存。如果其特性與要分選的細胞相同時,儀器就在這類細胞形成液滴時給該液滴充與指定的電荷,這樣,當(dāng)被選定的細胞形成液滴時就帶有特定的電荷,未被選定的細胞形成的細胞液滴及不含細胞的空白液滴不被充電,也就不帶電荷。
帶有電荷的液滴向下落入偏轉(zhuǎn)板間的靜電場時,依據(jù)所帶電荷符號向左或向右偏轉(zhuǎn),落入指定的收集器內(nèi),不帶電荷的液滴不發(fā)生偏轉(zhuǎn),垂直落入廢液槽中排出,從而實現(xiàn)細胞的分類。
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